CD86免疫熒光檢查

其他熒光物質(zhì)：酶作用后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)某些化合物本身無(wú)熒光效應(yīng)，一旦經(jīng)酶作用便形成具有強(qiáng)熒光的物質(zhì)。例如4-甲基傘酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基傘酮，后者可發(fā)出熒光，激發(fā)光波長(zhǎng)為360nm，發(fā)射光波長(zhǎng)為450nm。其他如堿性酸酶的底物4-甲基傘酮磷酸鹽和辣根過(guò)氧化物酶的底物對(duì)羥基乙酸等。鑭系螯合物某些3價(jià)稀土鑭系元素如銪（Eu3）、鋱（Tb3）、鈰（Ce3）等的螯合物經(jīng)激發(fā)后也可發(fā)射特征性的熒光，其中以Eu3應(yīng)用較廣。Eu3螯合物的激發(fā)光波長(zhǎng)范圍寬，發(fā)射光波長(zhǎng)范圍窄，熒光衰變時(shí)間長(zhǎng)，較適合用于分辨熒光免疫測(cè)定。熒光抗體法和熒光抗原法都屬于免疫熒光技術(shù)的范疇。CD86免疫熒光檢查

以帕金森病為例，其主要病理特征是中腦黑質(zhì)致密部的多巴胺能神經(jīng)元變性死亡，以及α-突觸**白異常聚集形成路易小體。利用多色免疫熒光技術(shù)，我們可以用一種顏色標(biāo)記α-突觸**白，用另一種顏色標(biāo)記多巴胺能神經(jīng)元的特異性標(biāo)志物，如酪氨酸羥化酶。這樣就能在腦組織切片中清晰地觀察到α-突觸**白在多巴胺能神經(jīng)元中的聚集情況，以及隨著疾病進(jìn)展，神經(jīng)元數(shù)量的減少和路易小體分布的變化。在亨廷頓病的研究中，多色免疫熒光同樣大有用途。亨廷頓病與亨廷頓蛋白（Htt）的異常擴(kuò)展有關(guān)，我們可以用不同顏色分別標(biāo)記異常擴(kuò)展的Htt蛋白、神經(jīng)元內(nèi)的其他重要蛋白以及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物。通過(guò)這種方式，可以深入探究異常Htt蛋白對(duì)神經(jīng)元功能的影響，以及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞在疾病發(fā)展過(guò)程中的作用，從而為尋找***神經(jīng)退行性疾病的新靶點(diǎn)提供依據(jù)。Glut2免疫組化免疫熒光技術(shù)可以用于研究細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖和細(xì)胞分化等生物學(xué)過(guò)程。

在病毒性肝炎的研究中，多重免疫組化可以同時(shí)標(biāo)記肝炎病毒的抗原，如乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝病毒**抗原（HBcAg），以及肝臟內(nèi)的免疫細(xì)胞標(biāo)志物，如 CD8 + T 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞標(biāo)志物 CD68 和細(xì)胞因子如干擾素 - γ（IFN - γ）。HBsAg 和 HBcAg 在肝細(xì)胞中的分布反映了乙肝病毒的***狀態(tài)，而免疫細(xì)胞和細(xì)胞因子則與機(jī)體對(duì)病毒的免疫反應(yīng)密切相關(guān)。通過(guò)觀察這些標(biāo)志物的關(guān)系，可以深入了解乙肝病毒在肝臟內(nèi)的復(fù)制、傳播過(guò)程，以及機(jī)體免疫系統(tǒng)是如何對(duì)病毒***作出反應(yīng)的。例如，如果發(fā)現(xiàn) HBcAg 主要位于肝細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)，且周圍有大量 CD8 + T 細(xì)胞浸潤(rùn)，這可能表示機(jī)體正在對(duì)病毒***的肝細(xì)胞進(jìn)行免疫***。

注意:從加熒光二抗起,后面所有操作步驟都盡量在較暗處進(jìn)行.DAPI復(fù)染核:爬片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。封片：爬片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。玻片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。鏡檢拍照：切片于熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（DAPI紫外激發(fā)波長(zhǎng)330-380nm，發(fā)射波長(zhǎng)420nm，發(fā)藍(lán)光；FITC激發(fā)波長(zhǎng)465-495nm，發(fā)射波長(zhǎng)515-555nm，發(fā)綠光；CY3激發(fā)波長(zhǎng)510-560，發(fā)射波長(zhǎng)590nm，發(fā)紅光）。兩種抗體同時(shí)孵育：由于FIT容易萃滅，因此在孵育抗體時(shí)后孵育FITC二抗(孵育二抗一定要避光。免疫熒光技術(shù)具有高靈敏度和高特異性，可以檢測(cè)非常低濃度的目標(biāo)分子。

細(xì)胞免疫熒光在蛋白定位研究以及細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方面發(fā)揮著極為重要的作用。細(xì)胞免疫熒光技術(shù)乃是將免疫技術(shù)與熒光標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行有機(jī)融合。其具體原理為，在抗原-抗體發(fā)生反應(yīng)之后，運(yùn)用熒光進(jìn)行標(biāo)記，當(dāng)標(biāo)記工作完成，通過(guò)顯微鏡去觀測(cè)細(xì)胞內(nèi)某種抗原成分的具體數(shù)量情況，由此能夠開展一個(gè)詳盡的定位研究，并且還能夠?yàn)榧?xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)給予一個(gè)清晰明確的指引方向。細(xì)胞免疫熒光具備敏感性極強(qiáng)、特異性超高、速度極快等明顯特點(diǎn)，是當(dāng)下相當(dāng)常用的一種組織學(xué)技術(shù)，同時(shí)也是頗為精確的。免疫熒光染色的重點(diǎn)原理在于借助抗原抗體之間所具有的特異性結(jié)合來(lái)對(duì)目的蛋白予以顯示，這主要涵蓋了蛋白與一抗進(jìn)行結(jié)合，其次是帶有熒光基團(tuán)的二抗能夠識(shí)別并與一抗相結(jié)合，如此一來(lái)，在熒光顯微鏡下便能夠清晰地觀察到熒光的存在。例如，當(dāng)我們想要研究某種特定蛋白在細(xì)胞內(nèi)的位置時(shí)，就可以利用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)，通過(guò)抗原-抗體反應(yīng)和熒光標(biāo)記，準(zhǔn)確地確定該蛋白在細(xì)胞中的具體分布情況；又如在探究細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑時(shí)，細(xì)胞免疫熒光也能發(fā)揮關(guān)鍵作用，幫助我們清晰地了解信號(hào)分子的傳遞和變化。這些都充分體現(xiàn)了細(xì)胞免疫熒光技術(shù)在生物學(xué)研究中的重要價(jià)值和廣泛應(yīng)用。免疫熒光技術(shù)通過(guò)熒光信號(hào)的觀察來(lái)確定抗原或抗體的分布和定位。S100 beta免疫

免疫熒光技術(shù)可以用于研究免疫系統(tǒng)的功能和異常。CD86免疫熒光檢查

免疫組化對(duì)于內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病的診斷有著重要的助力作用。內(nèi)分泌系統(tǒng)通過(guò)分泌***來(lái)調(diào)節(jié)身體的各種生理功能，內(nèi)分泌***如甲狀腺、腎上腺、胰腺等發(fā)生病變會(huì)導(dǎo)致多種疾病。在甲狀腺疾病的診斷中，免疫組化是一種重要的輔助手段。例如，在橋本甲狀腺炎的診斷中，免疫組化可以檢測(cè)甲狀腺組織中的自身抗體，如甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體（TPOAb）和甲狀腺球蛋白抗體（TgAb）。這些抗體在橋本甲狀腺炎患者的甲狀腺組織中常常呈現(xiàn)高表達(dá)，通過(guò)免疫組化可以直觀地觀察到抗體與甲狀腺細(xì)胞的結(jié)合情況，輔助診斷橋本甲狀腺炎，并判斷疾病的嚴(yán)重程度。在腎上腺疾病方面，如腎上腺皮質(zhì)*的診斷，免疫組化可以檢測(cè)腎上腺皮質(zhì)*細(xì)胞中的標(biāo)志物，如inhibin-A、Melan-A等。這些標(biāo)志物有助于區(qū)分腎上腺皮質(zhì)*與其他腎上腺**，為制定合理的治療方案提供依據(jù)。CD86免疫熒光檢查