杭州國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR

研究方向

       低豐度及稀有序列的精確定量

       目前對(duì)于低豐度目標(biāo)序列的檢測(cè)，定量PCR、雜交、毛細(xì)管測(cè)序及NGS等方法都因受到背景DNA的干擾，使得檢測(cè)靈敏度及精確性都達(dá)不到精細(xì)定量的要求(如定量PCR檢測(cè)中Ct值大于33的情況下，其重復(fù)性就不是很高)， 而微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)通過**的微滴  化處理，使得稀有的核酸序列從大量的背景DNA中分離出來，從而提高了檢測(cè)的靈敏度及重復(fù)性。

       此外，由于樣品微滴化處理的同時(shí)，也將樣品中可能存在的***劑進(jìn)行了分裝，提高了數(shù)字PCR擴(kuò)增對(duì)于***劑的耐受程度，因此可具體應(yīng)用于很多臨床樣品(血液、尿液、糞便、痰液、腦脊液等)中對(duì)**核酸標(biāo)記物的檢測(cè)。一般而言，毛細(xì)管電泳和定量PCR的檢測(cè)靈敏度約在10%;NGS的靈敏度可達(dá)到1%;而ddPCR的檢測(cè)下限為0.001%。 單次微滴生成*需2分鐘。杭州國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR

研究方向

*****的實(shí)時(shí)監(jiān)控

已有數(shù)篇文章報(bào)道了使用數(shù)字PCR技術(shù)對(duì)患者***過程中的循環(huán)**DNA(ctDNA)進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)時(shí)監(jiān)控疾病進(jìn)展。在非小細(xì)胞肺*、乳腺*和腸*等多種**患者中都取得了令人鼓舞的結(jié)果。與影像學(xué)及其他常規(guī)指標(biāo)相比，ctDNA突變及豐度改變通常會(huì)提前數(shù)月出現(xiàn)，這樣就可以提醒醫(yī)生及時(shí)調(diào)整***方案，使患者得到更有效的***。

隨著數(shù)字PCR熒光通道的增加和多指標(biāo)檢測(cè)的成熟，數(shù)字PCR將會(huì)進(jìn)入更多應(yīng)用領(lǐng)域，有力推動(dòng)生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)診斷、檢驗(yàn)檢疫、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域的快速發(fā)展。 杭州國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR基因表達(dá)差異的監(jiān)測(cè)。

與常規(guī)的PCR的方法相比，dPCR有很好的優(yōu)勢(shì)。

***定量

常規(guī)PCR和實(shí)時(shí)熒光PCR定量檢測(cè)都需要已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)DNA制定標(biāo)準(zhǔn)曲線，由于樣品測(cè)定在各種條件上不會(huì)完全一致，會(huì)造成PCR擴(kuò)增效率的差異，從而影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而ddPCR不受標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴(kuò)增動(dòng)力學(xué)影響，可以進(jìn)行***定量。

樣品需求量低

在檢測(cè)珍貴樣品和樣品核酸存在降解時(shí)具有明顯的優(yōu)勢(shì)。

高靈敏度

ddPCR本質(zhì)上是將一個(gè)傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)分成了數(shù)萬個(gè)**的PCR反應(yīng)，在這些反應(yīng)中可以精確地檢測(cè)到很小的目的片段的差異、單拷貝甚至是低濃度混雜樣品，且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。

高耐受性

由于目的序列被分配到多個(gè)微滴中，***降低了體系間的影響以及背景序列和***物對(duì)反應(yīng)的干擾，擴(kuò)增基質(zhì)效應(yīng)大大減小。

dPCR的基本原理

       目前dPCR主要有兩種形式，芯片式和液滴式，但基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中，每個(gè)反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個(gè)。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后，有一個(gè)核酸分子模板的反應(yīng)器就會(huì)給出熒光信號(hào)，沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號(hào)。根據(jù)相對(duì)比例和反應(yīng)器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度?？梢允褂脦追N不同的方法來分配樣品，包括微孔板，毛細(xì)管，油乳劑和帶有核酸結(jié)合表面的小型化腔室陣列。樣品的分配使人們可以通過假設(shè)分子種群遵循泊松分布來估計(jì)不同分子的數(shù)量，根據(jù)泊松分布的原理，反應(yīng)體系中目標(biāo)分子的拷貝數(shù)可以通過公式A=-ln[(N-X)/N]*N計(jì)算，從而解決了多個(gè)目標(biāo)分子存在于單個(gè)液滴中的可能性。 數(shù)字PCR技術(shù)是公認(rèn)的液體活檢領(lǐng)域靈敏度比較好的檢測(cè)方法。

       數(shù)字PCR(d PCR)是近年來引起重視并迅速發(fā)展起來的一種突破性的核酸定量分析技術(shù)。該技術(shù)先將核酸模板進(jìn)行稀釋,分配到大量**的反應(yīng)單元中,使每個(gè)反應(yīng)單元中只有單個(gè)模板分子,然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),擴(kuò)增結(jié)束后對(duì)每個(gè)反應(yīng)室的熒光信號(hào)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,來定量DNA拷貝數(shù)。數(shù)字PCR采用先擴(kuò)增后定量,因此不依賴擴(kuò)增曲線的循環(huán)閾值(Ct),也無需采用內(nèi)參基因和標(biāo)準(zhǔn)曲線,準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好,可以實(shí)現(xiàn)***定量分析。由于其獨(dú)特的技術(shù)優(yōu)勢(shì),已經(jīng)在臨床診斷、轉(zhuǎn)基因成分定量、單細(xì)胞基因表達(dá)分析、環(huán)境微生物檢測(cè)和下一代測(cè)序等研究領(lǐng)域顯示出巨大的優(yōu)勢(shì)和應(yīng)用前景。適用復(fù)雜樣品的檢測(cè)。杭州國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR

數(shù)字PCR儀廣泛應(yīng)用于醫(yī)療、農(nóng)業(yè)、環(huán)境等領(lǐng)域。杭州國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR

研究方向

無創(chuàng)產(chǎn)前篩查

       無創(chuàng)傷的產(chǎn)前診斷, 如21號(hào)染色體為3倍體的唐氏綜合征、已知父母基因型的胎兒地貧檢測(cè)或已知父母基因型的其它核酸病檢測(cè)(孟德爾相關(guān)遺傳疾病)。目前標(biāo)本來源主要為血液，而待檢測(cè)的胎兒DNA受到母體DNA的干擾，影響了檢測(cè)的準(zhǔn)確性。而QX200檢測(cè)系統(tǒng)獨(dú)特的微滴化技術(shù)完全可以作為二代測(cè)序法的補(bǔ)充來進(jìn)行的無創(chuàng)傷產(chǎn)前診斷，從而提高工作效率及節(jié)約成本。

轉(zhuǎn)基因食品或成分的檢測(cè)

       目前在確定轉(zhuǎn)基因作物或成分的含量時(shí)采取定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線法，這種方法需要依賴于已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品(Certified Reference Materials Calibrants, CRMCs)。ddPCR***定量的方式可以徹底解決這些標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定標(biāo)工作。 杭州國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR

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