常州微滴式數(shù)字PCR哪家好

來源: 發(fā)布時間:2021-12-17

研究方向基因表達(dá)差異研究

檢測時完全不依賴傳統(tǒng)的Ct值即可實現(xiàn)真正意義上的***定量,從而提供了比實時熒光定量PCR更精確的基因差異表達(dá)研究,尤其對于那些靶基因表達(dá)差異微小的情況:microRNA、lncRNAs等的表達(dá)分析、等位基因的不平衡表達(dá)、單細(xì)胞基因表達(dá)分析、Exosome內(nèi)核酸分子定量分析等。



拷貝數(shù)變異(CNV)研究

微滴化的樣品處理及檢測,這種擺脫Ct值的計算方法而直接獲取目標(biāo)基因的***拷貝數(shù),為拷貝數(shù)變異的研究提供了***的檢測精度。是其他諸如二代測序、芯片雜交等平臺無法達(dá)到的,因此采用數(shù)字PCR能夠有效對NGS、aCGH的實驗結(jié)果進(jìn)行驗證,并具有成本低、通量高的特點。



MicroDrop?數(shù)字PCR是擁有完全自主知識產(chǎn)權(quán)的微滴式數(shù)字PCR儀。常州微滴式數(shù)字PCR哪家好

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       同時,從公式也可以看出,隨著反應(yīng)陽性體系數(shù)(X)的增加,體系中目標(biāo)分子的拷貝數(shù)相對于X會有較大的差距,隨著X的持續(xù)增加,數(shù)字PCR結(jié)果的不確定度也隨著提高,總體來說,數(shù)字PCR陽性體系的數(shù)量不得超過總體系數(shù)量的80%。另一個方面,N的增加會使整個數(shù)字PCR體系具有較大的線性范圍,并可以提高反應(yīng)的靈敏度、穩(wěn)定性以及可重復(fù)性。因此,目前dPCR都需要在成本可控的情況下,增加分配的腔室數(shù)和液滴數(shù)。


商業(yè)化dPCR平臺及其特點

       發(fā)展到現(xiàn)在,市面上常見的dPCR主要有兩種:微滴式dPCR(droplet dPCR,ddPCR)和芯片式dPCR(chip dPCR,cdPCR)技術(shù)。由于芯片式dPCR制造芯片的成本較高,目前微滴式dPCR正越來越受到企業(yè)的認(rèn)可。 常州微滴式數(shù)字PCR哪家好關(guān)于甲基化含量的鑒定。

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定量PCR和數(shù)字PCR的特點:


1. 在20多年的使用和發(fā)展中,定量PCR作為一種技術(shù)平臺,已經(jīng)產(chǎn)出海量的數(shù)據(jù),在工業(yè)界和分子檢測的某些應(yīng)用上,定量PCR已經(jīng)成為“金標(biāo)準(zhǔn)”?;A(chǔ)研究方面,則形成了被稱為MIQE的“定量PCR標(biāo)準(zhǔn)實驗指南”。   

2. 在定量PCR的各種應(yīng)用中,基因表達(dá)分析(gene expression analysis)的應(yīng)用比重約占七成,綜合各種因素來看,眼下定量PCR還是進(jìn)行基因表達(dá)研究的理想手段。   

3. 上述的“各種因素”具體展開,主要包括:通量、自動化程度、各種檢測探針與染料、檢測通道、成本和可參考文獻(xiàn)與protocol的數(shù)目等等。   

4. 就目前市場上已有的數(shù)字PCR設(shè)備來看,定量PCR在檢測的線性范圍上具有優(yōu)勢,意味著同一個run內(nèi)可對各種表達(dá)豐度的樣品進(jìn)行分析。



        精細(xì)診斷是精細(xì)醫(yī)學(xué)的關(guān)鍵環(huán)節(jié),液體活檢作為一種無創(chuàng)、均一的檢測技術(shù),迅速成為精細(xì)診斷領(lǐng)域的新星,2015年被《麻省理工大學(xué)科技評論》評選為年度**突破技術(shù), 2017年入選世界經(jīng)濟(jì)論壇評出的全球**新興技術(shù),引發(fā)了全球科研、臨床和產(chǎn)業(yè)界的極大熱情,已在**、產(chǎn)前診斷、***移植等疾病領(lǐng)域***被應(yīng)用。

       數(shù)字PCR技術(shù)與高通量的二代測序技術(shù),共同組成液體活檢領(lǐng)域的兩大利器;數(shù)字PCR技術(shù)是公認(rèn)的液體活檢領(lǐng)域靈敏度比較高的檢測方法,采用有限稀釋的方法將目標(biāo)分子分割到**的反應(yīng)體系中,在不依賴標(biāo)準(zhǔn)曲線條件下實現(xiàn)靶標(biāo)***定量檢測,能檢測低至0.01%的突變基因;Bio-Rad及Thermo Fisher目前是這一領(lǐng)域的主導(dǎo)者,分別采用微滴或芯片方式將樣本分割成兩萬份,MiniDrop?創(chuàng)新性采用高壓驅(qū)動的方法將樣本分割成50萬份,打破了國外廠商在微滴式數(shù)字PCR領(lǐng)域的壟斷。



理論上可覆蓋qPCR(熒光定量PCR)的所有應(yīng)用。

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定量PCR和數(shù)字PCR的特點:


       5. 目前定量PCR已經(jīng)能實現(xiàn)高通量樣品條件下的自動化操作。   

       6. 數(shù)字PCR在單分子層面上的***定量,可以徹底擺脫對標(biāo)準(zhǔn)曲線的依賴而直接給出靶序列的拷貝數(shù),提高了實驗結(jié)果在批內(nèi)和批間的穩(wěn)定性,甚至能用來對標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行定標(biāo)。   

       7. 基于***定量的方式,數(shù)字PCR結(jié)果的高重復(fù)性和高精度可實現(xiàn)微小差異的基因表達(dá)分析,如等位基因的不平衡表達(dá)、單細(xì)胞基因表達(dá)分析、microRNA表達(dá)分析等等。所謂“微小差異”的標(biāo)準(zhǔn)一般而言是指表達(dá)水平的差異在2倍以內(nèi)。   

       8. 同等條件下,數(shù)字PCR在靈敏度方面擁有優(yōu)勢,使得該技術(shù)已成為**的液態(tài)活檢、病原微生物檢測、轉(zhuǎn)基因成分測定、宿主殘留DNA分析等的熱門技術(shù)。


檢測靈敏度高達(dá)萬分之一。廣州JUE對定量數(shù)字PCR哪家好

流式檢測,順序逐一檢測每個微滴,無熒光交叉干擾,微滴陰性陽性判讀準(zhǔn)確。常州微滴式數(shù)字PCR哪家好

       數(shù)字PCR檢測及分析原理在上世紀(jì)90年代就被提出來了,但是無奈受限于當(dāng)時的技術(shù)條件,樣本稀釋及分配都是靠手工來完成的,受到很多因素的干擾和限制;并且結(jié)果分析對于研究者來說也十分枯燥與繁瑣,因此在很長一段時間dPCR發(fā)展停滯不前。后來由于微流控技術(shù)與微納集成制造工藝的發(fā)展解決了dPCR過程中的幾個關(guān)鍵技術(shù)問題,推動了dPCR的研究與商業(yè)化的發(fā)展。


       目前根據(jù)dPCR樣本稀釋分配的方式,基本可分為三大類,一種是基于大規(guī)模集成微流控芯片;第二種是使用微反應(yīng)室/孔板;第三種是微滴式。但不論是走芯片式還是微滴式,其基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或者微滴當(dāng)中,每個反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于1或者等于1。經(jīng)過PCR擴增之后,有一個核酸分子的模板的反應(yīng)器就會給出熒光信號,沒有模板的反應(yīng)器沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應(yīng)器的體積,可以推算出原始溶液的核酸濃度。 常州微滴式數(shù)字PCR哪家好

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