無錫數(shù)字PCR簡介

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-03-01

MicroDrop-100微滴式數(shù)字PCR 應(yīng)用范圍如下:

a. 動植物檢驗(yàn)檢疫,動物源性分析、極微量病原菌檢測定量分析、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測;

b. 降低篩查成本、縮短檢測周期,適用于T13\T18\T21三體綜合征等遺傳病的風(fēng)險(xiǎn)評估;適用于zhong瘤早期篩查、分子分型、靶向用藥和療效監(jiān)測等;適用于傳染性疾病的早期診斷和診療指導(dǎo);

c. 可用于DNA甲基化的檢測、CRISPR-Cas9基因編輯效率檢測等。

d.基因表達(dá)差異監(jiān)測單細(xì)胞研究:測序、PCR

e.無創(chuàng)產(chǎn)前篩查:低成本、快速、傳染性疾?。篐BV、HIV、COVID-19 定量 FAM、VIC雙通道熒光檢測。無錫數(shù)字PCR簡介

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dPCR的基本原理

       目前dPCR主要有兩種形式,芯片式和液滴式,但基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中,每個反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后,有一個核酸分子模板的反應(yīng)器就會給出熒光信號,沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應(yīng)器的體積,就可以推算出原始溶液的核酸濃度??梢允褂脦追N不同的方法來分配樣品,包括微孔板,毛細(xì)管,油乳劑和帶有核酸結(jié)合表面的小型化腔室陣列。樣品的分配使人們可以通過假設(shè)分子種群遵循泊松分布來估計(jì)不同分子的數(shù)量,根據(jù)泊松分布的原理,反應(yīng)體系中目標(biāo)分子的拷貝數(shù)可以通過公式A=-ln[(N-X)/N]*N計(jì)算,從而解決了多個目標(biāo)分子存在于單個液滴中的可能性。 蘇州廣東數(shù)字PCR報(bào)價(jià)全封閉體系,自動化流程操作。

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MicroDrop-100數(shù)字PCR有什么優(yōu)勢?

       1.MicroDrop-100數(shù)字PCR所產(chǎn)生的微滴數(shù)是目前市面微滴式數(shù)字PCR里相對較高的產(chǎn)品,可將樣品分割為10萬份,更符合泊松分布數(shù)學(xué)模型,可以忽略更多的誤差因素;此外,高微滴數(shù)在多重?cái)?shù)字PCR上的優(yōu)勢也會更大。

       2.數(shù)字PCR可選全中文界面,對國內(nèi)用戶十分友好,可以說,拿到即可上手。

       3.數(shù)字PCR是一個開放性的平臺,在試劑方面除了產(chǎn)品列表上的檢測試劑盒,還有通用的反應(yīng)預(yù)混液,客戶自行設(shè)計(jì)引物探針即可進(jìn)行新項(xiàng)目的檢測。此外,永諾非常歡迎進(jìn)行定制、合作開發(fā)檢測試劑盒。


       數(shù)字PCR(Digtal PCR)是一種核酸定量精密檢測的新興技術(shù)手段,于20世紀(jì)由Vogelstein等提出。它是將稀釋后的核酸模板分配到大量不同的反應(yīng)單元中,使每個反應(yīng)單元中有一個或沒有核酸。利用PCR擴(kuò)增的同時(shí),加入可檢測熒光。待擴(kuò)增結(jié)束時(shí),使用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采集每個反應(yīng)單元出現(xiàn)的熒光次數(shù),從而定量檢測樣本中的核酸濃度。

       基于分液方式的不同,數(shù)字PCR主要分為3種:微流體數(shù)字PCR(Microfluidic digital PCR,mdPCR)、微滴數(shù)字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)和芯片數(shù)字PCR(Chip digital PCR,cdPCR)。


2個光電倍增管(PMT),靈敏度及增益優(yōu)于MPCC或CCD。

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       在定量PCR時(shí),我們常常糾結(jié)一個問題,究竟是相對定量還是***定量呢?如今,你無需糾結(jié)了,因?yàn)閿?shù)字PCR(digital PCR)來了。盡管這兩種技術(shù)有些類似,都是估計(jì)起始樣品中的核酸量,但它們有一個重要的區(qū)別。定量PCR是依靠標(biāo)準(zhǔn)曲線或參照基因來測定核酸量,而數(shù)字PCR則讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù),是對起始樣品的***定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應(yīng)用領(lǐng)域:拷貝數(shù)變異、突變檢測、基因相對表達(dá)研究(如等位基因不平衡表達(dá))、二代測序結(jié)果驗(yàn)證、miRNA表達(dá)分析、單細(xì)胞基因表達(dá)分析等。數(shù)字PCR技術(shù)是公認(rèn)的液體活檢領(lǐng)域靈敏度比較好的檢測方法。無錫廣東數(shù)字PCR品牌

分辨率——低至0.1倍基因表達(dá)差異。無錫數(shù)字PCR簡介

二代測序輔助建庫

       目前靶向測序建庫方法包括擴(kuò)增子方法,在均相溶液中,當(dāng)擴(kuò)增引物增加時(shí),由于擴(kuò)增引物之間的相互作用,從而影響擴(kuò)增的效率;如果將其分散到大量微液滴中擴(kuò)增,將可降低引物間相互作用,提高擴(kuò)增效率。同時(shí)還可以實(shí)現(xiàn)對于少量模板的有效擴(kuò)增,得到更多的有效測序數(shù)據(jù)。


CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗(yàn)證

       CRISPR-Cas9技術(shù)的發(fā)明,是基因編輯技術(shù)的一大突破,但如何驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)是否成功,仍需要高靈敏度的檢測方法,數(shù)字PCR技術(shù)可以滿足這一需求。Broad研究所張鋒團(tuán)隊(duì)發(fā)明了以CRISPR為基礎(chǔ)的SHERLOCK技術(shù)可以對核酸進(jìn)行高靈敏度的定性檢測,但精確定量評估時(shí)仍采取了數(shù)字PCR進(jìn)行確認(rèn)。 無錫數(shù)字PCR簡介

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