MicroDrop-100數(shù)字PCR原理

       MicroDrop-100微滴式數(shù)字PCR是具有國內(nèi)自主知識產(chǎn)權(quán)的第三代JUE對定量PCR系統(tǒng)，整套系統(tǒng)由MicroDrop-100A微滴生成儀、 MicroDrop-100B微滴檢測儀以及結(jié)果數(shù)據(jù)分析設(shè)備等構(gòu)成。系統(tǒng)通過自主設(shè)計的微流控芯片，利用油水相不兼容的原理，在2分鐘時間內(nèi)將PCR體系分割成100,000油包水的體系，每個體系為**的PCR反應(yīng)體系，體積約為0.2nL，單次實驗一次可生成8個樣本的油包水體系。由于油包水體系的分割效應(yīng)，使得數(shù)字PCR受PCRYi制物的影響相對較小，有利于復(fù)雜環(huán)境樣本的實驗操作。區(qū)別于熒光定量PCR的過程性判讀方法，數(shù)字PCR結(jié)果判讀為終點法，故其對PCR擴增效率的依賴也相對較小。  單次微滴生成*需2分鐘。MicroDrop-100數(shù)字PCR原理

       數(shù)字PCR(d PCR)是近年來引起重視并迅速發(fā)展起來的一種突破性的核酸定量分析技術(shù)。該技術(shù)先將核酸模板進行稀釋,分配到大量**的反應(yīng)單元中,使每個反應(yīng)單元中只有單個模板分子,然后進行PCR擴增反應(yīng),擴增結(jié)束后對每個反應(yīng)室的熒光信號進行統(tǒng)計學(xué)分析,來定量DNA拷貝數(shù)。數(shù)字PCR采用先擴增后定量,因此不依賴擴增曲線的循環(huán)閾值(Ct),也無需采用內(nèi)參基因和標準曲線,準確度高、重現(xiàn)性好,可以實現(xiàn)***定量分析。由于其獨特的技術(shù)優(yōu)勢,已經(jīng)在臨床診斷、轉(zhuǎn)基因成分定量、單細胞基因表達分析、環(huán)境微生物檢測和下一代測序等研究領(lǐng)域顯示出巨大的優(yōu)勢和應(yīng)用前景。MicroDrop-100數(shù)字PCR原理數(shù)字PCR技術(shù)與高通量的二代測序技術(shù)，共同組成液體活檢領(lǐng)域的兩大利器。

相對于二代測序、基因芯片和定量PCR而言，數(shù)字PCR具備以下優(yōu)勢:

· 能夠有效區(qū)分濃度差異微小的樣品：更好的準確度、精密度和重復(fù)性，可以用于精確測定靶基因的相對表達，基因拷貝數(shù)變異分析等。

· 數(shù)字PCR可開發(fā)針對不同**、不同樣本以及不同的樣本環(huán)境提供檢測解決方案，該技術(shù)的應(yīng)用范圍廣，尤其在液體活檢領(lǐng)域，已開發(fā)針對肺*、乳腺*、腸*、胃*等上百個位點檢測試劑盒，可精細指導(dǎo)臨床***的診斷，以便患者在后續(xù)得到更及時并且適當?shù)?**方案提供。

       我國***擁有完全自主知識產(chǎn)權(quán)的微滴式數(shù)字PCR儀MiniDrop?研發(fā)成功并投入生產(chǎn)。MiniDrop?創(chuàng)新性采用高壓驅(qū)動的方法將樣本分割成50萬份，打破了國外廠商在微滴式數(shù)字PCR領(lǐng)域的壟斷。永諾生物依以微滴式數(shù)字PCR儀為**，打造了全自動液體處理工作站、核酸提取試劑盒等創(chuàng)新產(chǎn)品，致力于解決**、***領(lǐng)域的精細診斷這是國內(nèi)***微滴式數(shù)字PCR檢測系統(tǒng)，能廣泛應(yīng)用于醫(yī)療、農(nóng)業(yè)、環(huán)境等領(lǐng)域，未來，采用外周血、唾液、尿液、腦脊液等樣本進行低成本、高靈敏、快速的無創(chuàng)檢測成為可能。MicroDrop?數(shù)字PCR可廣泛應(yīng)用于科研、醫(yī)療、出入境檢驗檢疫等領(lǐng)域。

       數(shù)字PCR也叫Digital PCR（dPCR），是近幾年發(fā)展起來的一種核酸定量分析技術(shù)。相較于傳統(tǒng)熒光定量PCR來說，數(shù)字PCR對結(jié)果的判定不依賴于擴增曲線循環(huán)Ct值，不受擴增效率的影響，能夠直接讀出DNA的分子個數(shù)，能夠?qū)ζ鹗紭颖竞怂岱肿?**定量。

       數(shù)字PCR基本原理是將一個樣本分成幾十到幾萬份，然后再將其分配到不同的反應(yīng)單元中，使每個微滴單元包含一個或多個拷貝的核酸分子（即DNA模板），每個單元都會對目標分子進行擴增，然后再對每個單元進行熒光信號的統(tǒng)計并計算。相對而言，傳統(tǒng)PCR或qPCR反應(yīng)都是發(fā)生于同一體系當中，這也是數(shù)字PCR與其比較大的區(qū)別。 數(shù)字PCR技術(shù)是公認的液體活檢領(lǐng)域靈敏度比較好的檢測方法。無錫數(shù)字PCR簡介

分辨率——低至0.1倍基因表達差異。MicroDrop-100數(shù)字PCR原理

二代測序輔助建庫

       目前靶向測序建庫方法包括擴增子方法，在均相溶液中，當擴增引物增加時，由于擴增引物之間的相互作用，從而影響擴增的效率;如果將其分散到大量微液滴中擴增，將可降低引物間相互作用，提高擴增效率。同時還可以實現(xiàn)對于少量模板的有效擴增，得到更多的有效測序數(shù)據(jù)。

CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗證

       CRISPR-Cas9技術(shù)的發(fā)明，是基因編輯技術(shù)的一大突破，但如何驗證實驗是否成功，仍需要高靈敏度的檢測方法，數(shù)字PCR技術(shù)可以滿足這一需求。Broad研究所張鋒團隊發(fā)明了以CRISPR為基礎(chǔ)的SHERLOCK技術(shù)可以對核酸進行高靈敏度的定性檢測，但精確定量評估時仍采取了數(shù)字PCR進行確認。 MicroDrop-100數(shù)字PCR原理

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