植物外泌體iTRAQ

在運(yùn)輸DOX的研究中，Wei等選擇了已經(jīng)在臨床上使用的未成熟的樹(shù)突細(xì)胞作為母代細(xì)胞，通過(guò)化學(xué)轉(zhuǎn)染使其分泌的外泌體表面含有Lamp2b，這種蛋白可以與αv整合蛋白特異性iRGD肽結(jié)合，使外泌體對(duì)DOX的運(yùn)輸具有靶向性。將對(duì)iRGD肽靶向的外泌體和未經(jīng)靶向性處理的外泌體用DiR染料標(biāo)記，并分別靜脈注射入移植了人乳腺ai細(xì)胞的小鼠體內(nèi)，觀察到靶向的外泌體在注射30min后已經(jīng)出現(xiàn)在中流組織處，在注射2h后外泌體的含量高，而未經(jīng)靶向性處理的外泌體在注射后主要集中在肝臟，幾乎很少到達(dá)中流組織處，說(shuō)明對(duì)iRGD肽靶向的外泌體具有很好的靶向性。在抗原呈遞細(xì)胞中的外泌體發(fā)揮作用的報(bào)道后，人們對(duì)外泌體的興趣增強(qiáng)。植物外泌體iTRAQ

外泌體是細(xì)胞間信息傳遞的重要“信使”,可通過(guò)三種方式介導(dǎo)細(xì)胞通訊:(1)外泌體以旁分泌的方式與靶細(xì)胞相互作用,通過(guò)受體–配體作用黏附到靶細(xì)胞表面,隨后被內(nèi)吞入靶細(xì)胞,或直接將內(nèi)容物釋放到靶細(xì)胞內(nèi),從而激huo靶細(xì)胞;(2)外泌體的胞外膜蛋白可以被蛋白酶切割,產(chǎn)生的片段可以與靶細(xì)胞的細(xì)胞表面受體結(jié)合,從而激huo靶細(xì)胞;(3)外泌體還可以與靶細(xì)胞直接接觸發(fā)生膜融合,導(dǎo)致外泌體中的蛋白和核酸非選擇性轉(zhuǎn)移到目標(biāo)細(xì)胞,從而引起靶細(xì)胞的響應(yīng)。通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞間的通訊,外泌體不jin能夠參與多種生理過(guò)程,比如消除胞內(nèi)陳舊分子、呈遞抗原、分化調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞或髓樣細(xì)胞以抑制免疫反應(yīng),而且還可以參與疾病形成的病理過(guò)程,如通過(guò)與受體細(xì)胞的相互作用傳播病原物質(zhì)、促進(jìn)中流轉(zhuǎn)移過(guò)程中的血管生長(zhǎng)和中流細(xì)胞遷移。上海外泌體PKH26外泌體作為腦內(nèi)種瘤和神經(jīng)退行性疾病的新型標(biāo)記物。

外泌體攜帶的與疾病進(jìn)展緊密關(guān)聯(lián)的分子標(biāo)志物可用于疾病進(jìn)展的監(jiān)視、檢測(cè)和診斷,是一種潛在的非侵入性生物標(biāo)志物。由于外泌體本身可以作為抗原提呈小泡,且有較長(zhǎng)的循環(huán)半衰期,可用于免疫學(xué)相關(guān)研究,同時(shí),源自ai細(xì)胞的外泌體可以被工程化,發(fā)揮免疫刺激作用,可作為中流疫苗應(yīng)用于ai癥的免疫zhiliao。此外,外泌體穩(wěn)定而廣fan地分布在qi官和組織中,具有低免疫原性、高耐受性等特點(diǎn),且良好的膜滲透性可使其通過(guò)血腦屏障,因此可用作組織和qi官特異藥物輸送系統(tǒng),兼有高輸送效率和低副作用。因此,外泌體適合用作藥物載體遞送zhiliao劑(如阿霉素或姜黃素),zhiliao性miRNA、siRNA等核酸和蛋白質(zhì),運(yùn)送至靶位點(diǎn)后實(shí)現(xiàn)靶向zhiliao。

要使外泌體在臨床上得以更加廣fan的應(yīng)用，仍然需要更加深入的研究:(1)外泌體的提純方式主要是超速離心，這種提純方式效率較低，耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)并且相對(duì)昂貴，并不適宜在臨床上應(yīng)用。(2)外泌體雖然具有一定的靶向性，但這種靶向性較弱，不足以解決中流的靶向zhiliao問(wèn)題。通過(guò)在外泌體表面表達(dá)特異性肽的方法可以為上述問(wèn)題的解決提供較為有效的途徑。(3)在外泌體的載藥fang式方面，現(xiàn)在常用的電穿孔法雖更具優(yōu)勢(shì)，但往往會(huì)對(duì)外泌體或藥物的完整性產(chǎn)生影響，轉(zhuǎn)染外泌體法不能保證基因類藥物全部進(jìn)入外泌體內(nèi)而不是粘附在外泌體表面，存在著安全隱患。(4)外泌體作為細(xì)胞分泌物質(zhì)，其本身可調(diào)性并不如脂質(zhì)體以及聚合物基藥物載體。外泌體由于包含的內(nèi)容物具有明顯的組織特異性，為其能成為瘤早期診斷的生物標(biāo)志物提供了重要保障。

Vlassov等人發(fā)表的一篇外泌體的提取方法及組成的專利文獻(xiàn)中介紹，通過(guò)終濃度為8%的PEG6000與生物體液共孵育14h后，10000xg離心1h，可將直徑在30-150nm之間，且包含豐富RNA的外泌體沉淀下來(lái)。因此采用終濃度為8%的PEG6000沉淀血清中的外泌體，為了進(jìn)一步純化胎盤(pán)相關(guān)外泌體，將獲得的包含外泌體的沉淀用PBS重新懸浮后，加入非線性蔗糖密度梯度層，10000xg超速離心5h，將分層液采用PEG6000進(jìn)行2次沉淀。經(jīng)過(guò)多次實(shí)驗(yàn)反復(fù)驗(yàn)證，確定同時(shí)表達(dá)外泌體標(biāo)志蛋白分子及胎盤(pán)特異性蛋白分子的胎盤(pán)來(lái)源外泌體所在密度層。外泌體可以作為藥物治理的遞送系統(tǒng)。植物外泌體iTRAQ

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的滑膜成纖維細(xì)胞所釋放的外泌體。植物外泌體iTRAQ

已經(jīng)有許多關(guān)于外泌體作用的報(bào)導(dǎo)，根據(jù)這些現(xiàn)象實(shí)驗(yàn)中，從體液和培養(yǎng)上清中高純度提取的高純度外泌體，在活內(nèi)是否真的能發(fā)生作用尚未能確定。確認(rèn)外泌體生理作用的單獨(dú)方法就是明確外泌體的釋放機(jī)制，通過(guò)促進(jìn)或壓制釋放機(jī)制，分析會(huì)引起何種生理作用，這是進(jìn)一步研究的發(fā)展方向。甚至活內(nèi)的外泌體動(dòng)態(tài)（哪個(gè)外泌體遷移至何處）也會(huì)成為今后需要努力研究的重要課題。實(shí)際上，用PS親和法提取的人白血病細(xì)胞釋放的外泌體，其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較，PS親和法提取的外泌體，其蛋白特異性檢測(cè)可高出10~100倍以上，幾乎沒(méi)有混入外泌體以外的蛋白，回收量高，操作重復(fù)性好。植物外泌體iTRAQ