超速離心提取外泌體的過程

研究者利用電穿孔法對外泌體進行DOX的負載，進行體內(nèi)抗中流效果的研究。實驗結(jié)果顯示，負載DOX的iRGD肽靶向性外泌體對中流的抑制效果遠優(yōu)于單純的DOX。直接靜脈注射DOX，其不僅水溶性低，而且容易使DOX與血液中的蛋白結(jié)合，從而被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)識別捕獲，起不到理想的抗中流效果。而用iRGD肽靶向性的外泌體保護DOX，可以提高DOX水溶性，避免被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)捕捉，提高靶向性，從而降低由于用藥過量和非靶向性引起的毒性，起到更好的抗中流效果。外泌體作為細胞間信號傳導(dǎo)的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標(biāo)記話題比較熱門。超速離心提取外泌體的過程

目前，在各種健康與疾病模型中都發(fā)現(xiàn)，外泌體通過分子信息傳遞扮演著重要的角色。外泌體還越來越多地被認為是疾病的生物標(biāo)志物和預(yù)后因子，具有重要的臨床診斷和治理意義。除此之外，它們還有潛力被用于臨床，作為基因和藥物遞送的載體。健康人和多種疾病的患者會將含有不同RNA和蛋白質(zhì)成分的外泌體釋放到體液循環(huán)中，因其特殊性，外泌體可以作為生物標(biāo)志物來對疾病進行檢測。例如，從血液或尿液中分離的外泌體可以用作病癥、心臟病的診斷和預(yù)后的指標(biāo)。海洋生物外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)外泌體有望成為臨床檢測的新型疾病生物標(biāo)記。

外泌體是細胞間信息傳遞的重要“信使”,可通過三種方式介導(dǎo)細胞通訊:(1)外泌體以旁分泌的方式與靶細胞相互作用,通過受體–配體作用黏附到靶細胞表面,隨后被內(nèi)吞入靶細胞,或直接將內(nèi)容物釋放到靶細胞內(nèi),從而激huo靶細胞;(2)外泌體的胞外膜蛋白可以被蛋白酶切割,產(chǎn)生的片段可以與靶細胞的細胞表面受體結(jié)合,從而激huo靶細胞;(3)外泌體還可以與靶細胞直接接觸發(fā)生膜融合,導(dǎo)致外泌體中的蛋白和核酸非選擇性轉(zhuǎn)移到目標(biāo)細胞,從而引起靶細胞的響應(yīng)。通過介導(dǎo)細胞間的通訊,外泌體不jin能夠參與多種生理過程,比如消除胞內(nèi)陳舊分子、呈遞抗原、分化調(diào)節(jié)性T淋巴細胞或髓樣細胞以抑制免疫反應(yīng),而且還可以參與疾病形成的病理過程,如通過與受體細胞的相互作用傳播病原物質(zhì)、促進中流轉(zhuǎn)移過程中的血管生長和中流細胞遷移。

為了解決外泌體實驗遇到的上述的各種問題,Wako研發(fā)出MagCapture?外泌體提取試劑盒PS（MagCapture?ExosomeIsolationKitPS）提取高純度細胞外囊泡。外泌體膜含有分泌細胞源的蛋白和脂質(zhì)，眾所周知磷脂酰絲氨酸（PS）在活細胞通過翻轉(zhuǎn)酶作用導(dǎo)向細胞膜內(nèi)側(cè)，暴露在外泌體膜外側(cè)3）。另外，T-cellimmunoglobulindomainandmucindomain-containingprotein4（Tim4通過巨噬細胞進行細胞凋亡的吞噬受體）蛋白通過細胞外域IgV域與含有鈣離子的PS結(jié)合4）?；谏鲜鲋R，我們利用Tim4固化磁珠，在鈣離子存在下捕捉培養(yǎng)上清和血清等樣品中的外泌體，再添加螯合劑洗脫外泌體，這種外泌體純化方法是和金澤大學(xué)醫(yī)學(xué)系免疫學(xué)華山教授共同開發(fā)，并取得了成功。5）這是迄今為止取代黃金標(biāo)準(zhǔn)超速離心法的新型外泌體純化方法。PS親和法提取的外泌體，其蛋白特異性檢測可高出10~100倍以上。

在20世紀80年代，外泌體被描述為從網(wǎng)織紅細胞分泌的內(nèi)體來源的囊泡。人們對這些細胞外囊泡的興趣逐漸增加，因為它們似乎參與了很多細胞過程。外泌體攜帶蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和RNAs，介導(dǎo)體內(nèi)不同細胞類型之間的細胞間通訊，從而影響正常和病理狀態(tài)。只有近，科學(xué)家才認識到將外泌體與其他類型的細胞外囊泡分開的困難，這排除了特定功能對不同類型分泌的囊泡的明確歸因。為了闡明這個復(fù)雜但正在發(fā)展的科學(xué)領(lǐng)域，該綜述著重于外泌體和其他分泌的細胞外囊泡的定義。討論了它們的生物發(fā)生，分泌及其后續(xù)的命運，因為它們的功能依賴于這些重要過程。目前，提取外泌體的方法主要有超速離心法、PEG沉淀法。海洋生物外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)

外泌體具有檢測包括病癥在內(nèi)的許多病理狀況的潛力，可用于對心血管疾病和病癥等多種疾病的診斷和監(jiān)測。超速離心提取外泌體的過程

與干細胞不同的是：干細胞外泌體對受損的微環(huán)境不響應(yīng)，但它可以通過改變細胞外基質(zhì)，改變受體細胞的轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組，來調(diào)節(jié)細胞凋亡，生長，增殖和分化途徑。因此，干細胞外泌體具有減少細胞凋亡、減輕炎癥反應(yīng)、促進血管生成、抑制纖維化、提高組織修復(fù)潛力等重要生物學(xué)功能，在調(diào)控組織再生方面存在良好的臨床應(yīng)用前景。干細胞外泌體的優(yōu)點，體積?。杭{米級粒子，大小約為細胞的1/200，因此能很好地被人體所利用。免疫反應(yīng)程度低：外泌體不是細胞，只作為載具，外膜的表層上呈現(xiàn)較少的抗原，免疫系統(tǒng)難識別，對人體影響小。可穿透血腦障壁：體積小加上脂質(zhì)外膜的特性，使其可以通過血腦障壁，抵達腦部組織。超速離心提取外泌體的過程