細(xì)胞上清外泌體提取試劑盒原理

外泌體運(yùn)輸?shù)幕蝾愃幬镆部梢允莔iRNA，miRNA是一類非編碼的內(nèi)源性RNA，主要用于調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄后的基因表達(dá)。miRNA主要通過(guò)與mRNA的未翻譯的區(qū)域(UTRs)結(jié)合起到抑制基因表達(dá)和降解mRNA的作用。與siRNA不同，miRNA抑制mRNA的表達(dá)不需要完美的堿基配對(duì)，因此每種miRNA可以抑制多種蛋白質(zhì)的表達(dá)，而每種siRNA只針對(duì)一種蛋白質(zhì)。miRNA的運(yùn)載也存在著種種挑戰(zhàn):miRNA體內(nèi)穩(wěn)定性差、生物分布不理想、易被體內(nèi)酶降解以及容易引起副反應(yīng)等。越來(lái)越多的研究表明外泌體也是體內(nèi)運(yùn)載miRNA的優(yōu)良載體，并且利用外泌體運(yùn)輸miRNA的zhiliao方法已經(jīng)在許多疾病模型中得以應(yīng)用。外泌體被包裹在堅(jiān)硬的雙層膜中，雙層膜保護(hù)外泌體的內(nèi)容物，使外泌體能夠在組織中長(zhǎng)距離移動(dòng)。細(xì)胞上清外泌體提取試劑盒原理

在運(yùn)輸DOX的研究中，Wei等選擇了已經(jīng)在臨床上使用的未成熟的樹突細(xì)胞作為母代細(xì)胞，通過(guò)化學(xué)轉(zhuǎn)染使其分泌的外泌體表面含有Lamp2b，這種蛋白可以與αv整合蛋白特異性iRGD肽結(jié)合，使外泌體對(duì)DOX的運(yùn)輸具有靶向性。將對(duì)iRGD肽靶向的外泌體和未經(jīng)靶向性處理的外泌體用DiR染料標(biāo)記，并分別靜脈注射入移植了人乳腺ai細(xì)胞的小鼠體內(nèi)，觀察到靶向的外泌體在注射30min后已經(jīng)出現(xiàn)在中流組織處，在注射2h后外泌體的含量高，而未經(jīng)靶向性處理的外泌體在注射后主要集中在肝臟，幾乎很少到達(dá)中流組織處，說(shuō)明對(duì)iRGD肽靶向的外泌體具有很好的靶向性。細(xì)胞上清外泌體提取試劑盒原理外泌體其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較。

膜封閉的囊泡釋放到周圍環(huán)境中已經(jīng)成為近幾年來(lái)越來(lái)越受關(guān)注的問題。令人信服的證據(jù)表明囊泡可交換復(fù)雜的信息有助于這種興趣的興起。但是，也已經(jīng)清楚，不同類型的分泌囊泡共存，具有不同的細(xì)胞內(nèi)起源和形成模式，因此可能具有不同的組成和功能。外泌體是分泌囊泡的一種亞型。它們?cè)谡婧思?xì)胞內(nèi)的多泡小體中形成，并且當(dāng)這些多泡小體與質(zhì)膜融合時(shí)分泌到細(xì)胞外。有趣的是，不同的分子家族已被證明參與細(xì)胞內(nèi)形成外泌體及其隨后的分泌，這表明即使在外泌體中也存在不同的亞型。

各種細(xì)胞粘著分子在外泌體膜表面表達(dá)，由其決定外泌體被運(yùn)輸往哪一種細(xì)胞，期望開發(fā)利用該特征的新型DDS。外泌體在體液中十分穩(wěn)定，同時(shí)外囊泡所含的蛋白質(zhì)和RNA被外泌體的脂質(zhì)雙層膜所包被也不會(huì)分解。另外在從體液中提取外泌體后，體液可長(zhǎng)期穩(wěn)定保存，因此外泌體有望成為臨床檢測(cè)的新型疾病生物標(biāo)記。外泌體與各種疾病的相關(guān)性被檢測(cè)出，特別是血液中釋放的病細(xì)胞來(lái)源的外泌體，其與正常細(xì)胞來(lái)源外泌體在結(jié)構(gòu)分子上的差異倍受矚目，并作為癥狀早期診斷技術(shù)，應(yīng)用于與癥狀進(jìn)展相關(guān)的研究。甚至人們期望將尿液中的外泌體作為腎臟、前列腺疾病、膀胱疾病的新型診斷標(biāo)記，髓液中的外泌體作為腦內(nèi)種瘤和神經(jīng)退行性疾病的新型標(biāo)記物。實(shí)際上，用PS親和法提取的人白血病細(xì)胞釋放的外泌體。

外泌體調(diào)控毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞的機(jī)能，延長(zhǎng)毛發(fā)根部的囊生長(zhǎng)期，同時(shí)活化處于靜止期的毛發(fā)根部的囊，使其提前進(jìn)入新的生長(zhǎng)周期，實(shí)現(xiàn)了毛發(fā)的再次生長(zhǎng)。骨衰老小鼠注射外泌體試驗(yàn)證明：年輕血液中的外泌體同樣使衰老的組織重新煥發(fā)生機(jī)。來(lái)源于脂肪組織中的干細(xì)胞分泌一些信號(hào)分子和生長(zhǎng)因子，可以促使控制毛發(fā)根部的囊生長(zhǎng)周期的毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞進(jìn)行分化，向上遷移生成表皮細(xì)胞和皮脂腺，向下遷移生成毛母細(xì)胞。毛發(fā)根部的囊的生長(zhǎng)周期決定毛發(fā)的生長(zhǎng)周期，而毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞的機(jī)能決定了毛發(fā)根部的囊的活躍程度，外泌體靶向調(diào)控毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞的功能。近些年關(guān)于外泌體研究很普遍。安徽外泌體miRNA芯片

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的滑膜成纖維細(xì)胞所釋放的外泌體。細(xì)胞上清外泌體提取試劑盒原理

密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術(shù)。該方法需預(yù)先利用常用的梯度液介質(zhì)如蔗糖、碘克沙醇和氯化銫等，在離心管中構(gòu)筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶。根據(jù)密度梯度構(gòu)建和沉降方式的不同,又可以分為速率區(qū)帶離心法和等密度梯度離心法,前者主要根據(jù)顆粒的沉降速率分離,介質(zhì)密度均小于外泌體密度,離心時(shí)樣品在向超速離心管底部移動(dòng)時(shí),會(huì)通過(guò)密度不斷增加的密度梯度區(qū)帶,密度大的顆粒更容易穿過(guò)密度更高的梯度層,更快地到達(dá)管底,因此控制離心的時(shí)間很重要;等密度梯度離心法中的密度梯度區(qū)帶,則會(huì)根據(jù)樣品液中各種溶質(zhì)成分來(lái)進(jìn)行組合,離心過(guò)程中,無(wú)論離心時(shí)間多久,不同密度顆粒jin會(huì)富集到具有相同密度的梯度區(qū)帶,而不會(huì)沉淀到底部。細(xì)胞上清外泌體提取試劑盒原理