細(xì)胞上清外泌體circRNA測(cè)序

與干細(xì)胞不同的是：干細(xì)胞外泌體對(duì)受損的微環(huán)境不響應(yīng)，但它可以通過(guò)改變細(xì)胞外基質(zhì)，改變受體細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組，來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡，生長(zhǎng)，增殖和分化途徑。因此，干細(xì)胞外泌體具有減少細(xì)胞凋亡、減輕炎癥反應(yīng)、促進(jìn)血管生成、抑制纖維化、提高組織修復(fù)潛力等重要生物學(xué)功能，在調(diào)控組織再生方面存在良好的臨床應(yīng)用前景。干細(xì)胞外泌體的優(yōu)點(diǎn)，體積?。杭{米級(jí)粒子，大小約為細(xì)胞的1/200，因此能很好地被人體所利用。免疫反應(yīng)程度低：外泌體不是細(xì)胞，只作為載具，外膜的表層上呈現(xiàn)較少的抗原，免疫系統(tǒng)難識(shí)別，對(duì)人體影響小?？纱┩秆X障壁：體積小加上脂質(zhì)外膜的特性，使其可以通過(guò)血腦障壁，抵達(dá)腦部組織。蛋白質(zhì)分子在外泌體信號(hào)傳遞過(guò)程中起到了非常重要的作用。細(xì)胞上清外泌體circRNA測(cè)序

外泌體本身的惰性相當(dāng)高，但它們與細(xì)胞膜融合可將所攜帶的物質(zhì)和信號(hào)傳遞到受體細(xì)胞并改變其生物學(xué)功能，因此，外泌體是納米藥物遞送或基因治理的潛在載體。外泌體作為功能性小RNA和蛋白質(zhì)的天然載體也引起了藥物遞送領(lǐng)域的極大興趣，因?yàn)樗梢岳眠@些囊泡治理性遞送各種核糖核酸分子、肽和合成藥物。外泌體作為疾病診斷標(biāo)志物的潛在應(yīng)用依賴(lài)于基于外泌體的藥物遞送系統(tǒng)的技術(shù)突破，要將其用于臨床治理，外泌體的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)還面臨很大的挑戰(zhàn)。首先，對(duì)外泌體的具體合成機(jī)制、功能了解并不是非常詳細(xì)。其次，現(xiàn)在缺乏經(jīng)濟(jì)有效的外泌體分離技術(shù)。血漿血清提取試劑盒生產(chǎn)廠家在細(xì)胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可被蛋白酶剪切，碎片作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，喚醒細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。

Knepper等通過(guò)對(duì)透射電鏡得到的200個(gè)囊泡進(jìn)行粒徑分析，結(jié)果表明尿液中外泌體的粒徑分布約為35～40nm，磷脂雙分子層厚度約為直徑的1/5～1/10。透射電鏡結(jié)合免疫金標(biāo)記法能夠得到外泌體表面特征分子的信息，有助于揭示外泌體的產(chǎn)生機(jī)制與來(lái)源。動(dòng)態(tài)光散射(dynamiclightscattering，DLS)和納米顆粒跟蹤分析(nanoparticletrackinganaly[1]sis，NTA)都是利用光學(xué)手段獲得囊泡粒徑分布的方法。兩者的不同之處在于動(dòng)態(tài)光散射通過(guò)檢測(cè)散射光的強(qiáng)度計(jì)算得到顆粒粒徑，而納米顆粒跟蹤分析通過(guò)追蹤單個(gè)粒子的運(yùn)動(dòng)軌跡計(jì)算得到樣品濃度、粒徑分布等信息。

外泌體調(diào)控毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞的機(jī)能，延長(zhǎng)毛發(fā)根部的囊生長(zhǎng)期，同時(shí)活化處于靜止期的毛發(fā)根部的囊，使其提前進(jìn)入新的生長(zhǎng)周期，實(shí)現(xiàn)了毛發(fā)的再次生長(zhǎng)。骨衰老小鼠注射外泌體試驗(yàn)證明：年輕血液中的外泌體同樣使衰老的組織重新煥發(fā)生機(jī)。來(lái)源于脂肪組織中的干細(xì)胞分泌一些信號(hào)分子和生長(zhǎng)因子，可以促使控制毛發(fā)根部的囊生長(zhǎng)周期的毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞進(jìn)行分化，向上遷移生成表皮細(xì)胞和皮脂腺，向下遷移生成毛母細(xì)胞。毛發(fā)根部的囊的生長(zhǎng)周期決定毛發(fā)的生長(zhǎng)周期，而毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞的機(jī)能決定了毛發(fā)根部的囊的活躍程度，外泌體靶向調(diào)控毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞的功能。外泌體的提取的方式：密度梯度離心法。

外泌體在神經(jīng)系統(tǒng)中與神經(jīng)回路的控制相關(guān)，同時(shí)各種神經(jīng)退行性疾病的致病蛋白還可以通過(guò)外泌體釋放到細(xì)胞外并傳遞到其他細(xì)胞，與病情發(fā)展密切相關(guān)。病細(xì)胞釋放的外泌體含有許多與血管新生和免疫逃逸相關(guān)的分子，構(gòu)建適合病細(xì)胞生長(zhǎng)的微環(huán)境，促進(jìn)病細(xì)胞的發(fā)展。另外，病細(xì)胞來(lái)源的外泌體上粘著分子的表達(dá)形式?jīng)Q定著癥狀向身體部位的轉(zhuǎn)移途徑。近，有報(bào)告指出脂肪細(xì)胞釋放的外泌體對(duì)肝臟的遺傳基因表達(dá)有控制作用。許多病毒利用外泌體的產(chǎn)生路徑傳播細(xì)胞，受病毒傳播的細(xì)菌和寄生蟲(chóng)通過(guò)外泌體控制其他受細(xì)胞傳播的細(xì)菌、寄生蟲(chóng)的活動(dòng)。泌體是細(xì)胞內(nèi)源性的小囊泡，由大多數(shù)細(xì)胞分泌。血漿血清提取試劑盒生產(chǎn)廠家

干細(xì)胞外泌體有減少細(xì)胞凋亡、促進(jìn)血管生成、抑制纖維化等重要生物學(xué)功能，在調(diào)控組織再生方面有好的前景。細(xì)胞上清外泌體circRNA測(cè)序

研究采用蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀，極大地降低了外泌體的提取成本，且獲得的外泌體不僅表達(dá)外泌體公認(rèn)的標(biāo)志蛋白分子，同時(shí)也表達(dá)胎盤(pán)特異性蛋白分子，證明通過(guò)這種方法獲得的外泌體是胎盤(pán)來(lái)源外泌體。通過(guò)蔗糖密度梯度離心后得到的外泌體沉淀經(jīng)蛋白質(zhì)SDS-PAGE膠電泳，銀染后可見(jiàn)各蛋白分子條帶清晰可見(jiàn)，動(dòng)態(tài)光散射分析粒徑，結(jié)果顯示獲得的外泌體顆粒粒徑大部分分布于28-91nm之間，與文獻(xiàn)報(bào)道外泌體顆粒大小相一致。胎盤(pán)外泌體經(jīng)過(guò)PKH67熒光染料染色后，與細(xì)胞共孵育，熒光顯微鏡下觀察外泌體具備進(jìn)入細(xì)胞的活性，進(jìn)一步驗(yàn)證了我們應(yīng)用此種改良的分離方法可有效的獲得胎盤(pán)來(lái)源的外泌體。本研究通過(guò)蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀成功分離得到母體血清中胎盤(pán)來(lái)源外泌體，并從蛋白標(biāo)志分子、電鏡、粒徑及分布、進(jìn)入細(xì)胞活性四方面對(duì)其進(jìn)行了鑒定，為研究妊娠期間胎盤(pán)外泌體在正常妊娠及胎盤(pán)源性并發(fā)癥中的作用奠定了基礎(chǔ)。細(xì)胞上清外泌體circRNA測(cè)序

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