湖南外泌體PKH26

流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標志物CD63、CD81等相應抗體進行標記，可用流式細胞儀檢測到陽性表達，從而實現(xiàn)對外泌體的定量。但流式細胞技術檢測時需要單顆粒懸浮液，當外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時將導致一次觀察到多個顆粒，從而導致數(shù)據(jù)不準確。因此，為了通過流式細胞儀觀察，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結合固定在磁珠表面上，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中。在流式細胞術之前，可以在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡。當樣品通過流式細胞儀時采集熒光信號，不只可以對外泌體進行高通量分析，還可以基于抗原表達對外泌體進行定量或分類。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學（電子顯微鏡技術）、粒子大小以及標志蛋白等方式實現(xiàn)的。湖南外泌體PKH26

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準備工作繁雜，耗時，量少。細胞外泌體融合實驗外泌體顯示出了在診療各種疾?。ㄈ缧募〔『蜕窠?jīng)病）方面的潛力。

肉瘤細胞可以通過產生異常的抗肉瘤或肉瘤免疫應答并促進瘤子細胞的活動而大量產生外泌體，這些外泌體富含促病的細胞成分，例如PD-L1、mRNA和micro-RNA等免疫阻止蛋白，參與病癥的發(fā)展、轉移和耐藥性。值得注意的是，肉瘤分泌的外泌體表面和外泌體顆粒中均存在的PD-L1。ESCRT（運輸所需的內體分選復合體）參與將生物分子包裝到外泌體中，nSMase2（中性鞘磷脂酶2）和Rab蛋白調節(jié)外泌體分泌。已確定ESCRT、Rab27a和nSMase2參與外泌體PD-L1的包裝和分泌。外泌體可以將PD-L1轉運至其他PD-L1表達低或沒有PD-L1的細胞，并可能與PD-1結合。

被特定部位的細胞獲取的瘤子外泌體可為肉瘤的轉移準備轉移前微環(huán)境。用肺轉傾向的肉瘤細胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉傾向的肉瘤細胞重新定向。外泌體的蛋白質組學分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的肉瘤細胞來源的外泌體具有不同的整合素（integrin）表達譜，整合素α6β4和α6β1與肺轉有關，而整合素αvβ5與肝轉有關。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細胞獲取，進而分別降低了肺和肝的轉移。進一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細胞獲取后活躍了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達。通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預測肉瘤轉移的部位傾向性的診斷指標。外泌體內主要含有核酸、蛋白質和脂質等，可作為疾病診斷標記物、調控靶細胞功能、參與細胞生物學活動等。

外泌體是分泌的細胞外囊泡的主要群體，是具有生物活性的脂雙層囊泡，大小約為30-100nm，由不同類型的正常細胞和瘤子細胞自然產生和釋放。這些囊泡在細胞間通訊中起重要作用，并影響細胞外環(huán)境和免疫系統(tǒng)反應。外泌體通過內體途徑分泌到細胞外空間，并將各種生物活性分子（貨物）轉運至靶細胞。外泌體貨物的組成非常多樣化，包括各種免疫阻止和免疫刺激蛋白、趨化因子、細胞因子、細胞受體、脂質以及不同的核酸，例如miRNA和環(huán)狀RNA。外泌體可由間充質干細胞、淋巴細胞和瘤子細胞等多種類型細胞主動分泌釋放。外泌體摸主要成分

外泌體是具有生物活性的脂雙層囊泡。湖南外泌體PKH26

NTA技術已被作為外泌體表征手段之一，相較于其他表征方式NTA技術的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快。大致方法是：將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀，用激光光束穿過樣本，激光在腔室內與顆粒相互作用時會發(fā)生散射，通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光，捕捉外泌體的布朗運動，實現(xiàn)顆粒可視化。然后使用Stokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度，繼而估算粒子的大小。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒，包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍，但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù)，另外，NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運動的蛋白質聚集體，因此無法排除其他物質干擾。湖南外泌體PKH26

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