胞外囊泡和外泌體

PEG沉淀法分離外泌體：通常通過將無水聚合物，如聚乙二醇（PEG），與樣品混合來沉淀外泌體。PEG聚合物競爭性結(jié)合水分子，增加疏水性蛋白和脂質(zhì)分子的相互結(jié)合力從而沉淀外泌體，然后通過離心分離外泌體。這種分離的方法快速，簡便，可用于各種起始體積（從100μL到幾毫升）適合于各種研究和臨床設定。然而，這種方法缺乏選擇性，PEG聚合物不只會導致外泌體小泡沉淀，還會引起其他細胞外囊泡、細胞外蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)聚集體沉淀。因此，在使用這種方法之前，必須進行樣品預處理，例如過濾或超速離心，以減少較終的外泌體制劑的污染。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。胞外囊泡和外泌體

外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動力學特性，它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應方面發(fā)揮作用。除了它們的診療潛力，外泌體也有幫助疾病診斷的潛力。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報道，并且通過生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復雜貨物的組成?；谕饷隗w的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預后方面具有潛在的應用價值。疾病的進展和對診療的反應也可以通過外泌體的多組分分析來確定的。宇玫博外泌體提取試劑盒外泌體的納米球膜型結(jié)構由雙層脂質(zhì)形成。

根據(jù)內(nèi)侵量的不同，可以產(chǎn)生不同尺寸、不同含量的ILV。LSEs產(chǎn)生的MVBs具有確定的ILV聚集(未來的外泌體)。MVBs可以與自噬體融合，較終其內(nèi)容物在溶酶體中降解。降解產(chǎn)物可被細胞回收利用。MVBs也可以直接與溶酶體融合降解。不遵循這一軌跡的MVBs可通過細胞骨架和微管網(wǎng)絡轉(zhuǎn)運至質(zhì)膜，借助mvb-?？康鞍淄？吭谫|(zhì)膜的腔側(cè)。隨后胞吐導致具有與質(zhì)膜相似的脂質(zhì)雙分子層方向的外泌體的釋放。有幾種蛋白參與了外泌體的生物發(fā)生，包括RabGTPases、ESCRT蛋白，以及其他也被用作外泌體標記的蛋白(CD9、CD81、CD63、flotillin、TSG101、神經(jīng)酰胺和Alix)。

外泌體研究背景：胞外囊泡是從細胞膜上脫落或者由細胞分泌的具有雙層膜結(jié)構的囊泡狀小體，主要由微囊泡、凋亡小體、外泌體組成。而外泌體是其中一類小囊泡，直徑為30~150nm，密度1.10~1.18g/ml，可攜帶核酸、蛋白質(zhì)質(zhì)和脂質(zhì)等，存在于血液、唾液、尿液等多種體液中。越來越多的研究證實，外泌體可以通過細胞間轉(zhuǎn)移核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等特定物質(zhì)，發(fā)揮特殊的功能。如在抗原提呈細胞中呈遞抗原程中、腫細胞細胞發(fā)生了發(fā)展、神經(jīng)細胞信號轉(zhuǎn)導過程中都發(fā)揮著重要作用。對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷、療效評價和預后分析。外泌體的數(shù)量：人體中大約有1014個，近乎于平均每個細胞產(chǎn)生1000-10000個。

外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)（如細胞因子、生長因子）以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì)，在體內(nèi)參與細胞通訊、細胞遷移、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過程，與多種疾病的發(fā)生和進程密切相關。由于外泌體的特殊結(jié)構和功能，使得它具有潛在的應用價值，一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標，另一方面也可以作為診療手段，未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。外泌體研究，應選用血漿還是血清？答：血清是血液凝固之后收集的液體，所以其中少了纖維蛋白原，凝血因子，以及多了比較多凝血產(chǎn)物。纖維蛋白原可轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，具有凝血功能。在凝血過程中血小板會分泌大量的外泌體，有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌。外泌體可由間充質(zhì)干細胞、淋巴細胞和瘤子細胞等多種類型細胞主動分泌釋放。CD9外泌體慢病毒包裝

外泌體膜含有MHC-1/2蛋白，能綁定特異性的肽鏈。胞外囊泡和外泌體

血漿中的外泌體蛋白既可以當作標志物，也可以進行機理研究？首先，研究人員將慢性淋巴瘤（CLL）患者分為2個亞組：疾病進展期和疾病慢性期。然后利用質(zhì)譜技術分析了患者血漿外泌體蛋白組，發(fā)現(xiàn)S100-A9蛋白在進展期CLL患者中明顯高表達，可以作為CLL進展期診斷的輔助標志物。進一步，研究人員通過生信分析發(fā)現(xiàn)進展期CLL患者外泌體中的高表達蛋白質(zhì)主要與炎癥和氧化應激有關，而NF-κB通路正是承接此效應的關鍵通路。通過從進展期CLL患者中分離富含S100-A9蛋白的外泌體加入CLL患者的PBMC細胞中，證實了S100-A9+外泌體能夠明顯促進進展期CLL患者PBMC細胞中IκBα蛋白的磷酸化上調(diào)，進一步活躍NF-κB通路。該研究證通過血漿外泌體蛋白組分析不只找到輔助診斷進展期CLL的標志物，并證實了S100-A9+外泌體可通過形成正向反饋調(diào)控，不斷活躍進展期CLL患者自身PBMC細胞中的NF-κB通路，促進CLL進展的特殊機理。胞外囊泡和外泌體

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