青海免疫組化可以做什么

來源: 發(fā)布時間:2024-06-02

英瀚斯生物為您整理免疫組化實驗步驟

1、石蠟切片置于65℃烘箱中烘片2h,脫蠟至水,用PBS沖洗三次,每次5min。

2、切片置于EDTA緩沖液中微波修復,中火至沸后斷電,間隔10min低火至沸。

3、自然冷卻后PBS洗3次,每次5min。4、切片放入3%過氧化氫溶液,室溫下孵育10min,以阻斷內源性過氧化物酶。

5、PBS洗3次,每次5min,甩干后5%BSA封閉20min(封閉電荷)。

6、去除BSA液,每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織,4℃過夜。

7、PBS洗3次,每次5min。

8、去除PBS液,每張切片加50μl-100μl相應種屬的二抗,4℃孵育50min。

9、PBS洗3次,每次5min。

10、去除PBS液,每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液,顯微鏡控制顯色。

11、顯色完全后,蒸餾水或自來水沖洗,蘇木素復染,1%鹽酸酒精分化(1s),自來水沖洗,氨水返藍,流水沖洗。

12、切片經過梯度酒精(70-100%)10min一個梯度,脫水干燥,二甲苯透明,中性樹膠封固。 做免疫組化需要多少錢?青海免疫組化可以做什么

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免疫組化在在病理診斷中,隨著各種抗體新的用途不斷被發(fā)現(xiàn)及越來越多的新型抗體的出現(xiàn),免疫組化在cancer診斷及鑒別診斷、分類、預后判斷等方面產生了重大的影響。由于免疫組化技術也存在一些局限性,因此,深入研究免疫組化原理和技術,并努力實現(xiàn)規(guī)范化的操作,才能充分發(fā)揮免疫組化在病理的診斷及鑒別診斷、判斷預后、指導臨床醫(yī)療中的作用。

觀察組織切片中抗原的數(shù)量及其在組織中的分布情況,對抗原進行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學,由于抗原與抗體特異性結合,因此通過免疫組化使標記抗體的顯色劑(酶、熒光素、同位素、金屬離子等等)顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質)。IHC所用標本主要為兩大類:組織標本和細胞標本,其中制作組織標本更常用、更基本的方法是石蠟切片。石蠟切片對于組織形態(tài)保存好,有利于各種染色對照觀察,而且能長期保存;石蠟切片中使用的甲醛固定劑對組織內抗原暴露有一定的影響,但可進行抗原修復,是免疫組化中優(yōu)先選擇的組織標本制作方法。 甘肅靠譜免疫組化多少錢免疫組化方法步驟是什么?

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免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色? 

(1)縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。這是重要的一條。

(2)一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色,建議試用單克隆抗體看看。

(3)內源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高(含血細胞多的組織),需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色; 

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(4)非特異性組分與抗體結合,這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當增加濃度來加強封閉效果; 

(5)縮短DAB孵育時間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等; 

(6)適當增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時間,在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要; 

(7)防止標本染色過程中出現(xiàn)干片,這容易增強非特異性著色。

免疫組化實驗所用的組織和細胞標本是什么樣的?

實驗所用主要為組織標本和細胞標本兩大類,前者包括石蠟切片(病理大片和組織芯片)和冰凍切片,后者包括組織印片、細胞爬片和細胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標本**常用、**基本的方法,對于組織形態(tài)保存好,且能作連續(xù)切片,有利于各種染色對照觀察;還能長期存檔,供回顧性研究;石蠟切片制作過程對組織內抗原暴露有一定的影響,但可進行抗原修復,是免疫組化中優(yōu)先的組織標本制作方法。

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免疫組化臨床應用中,可以對傳染性疾病診斷。應用抗病毒、細菌、zhen菌和寄生蟲抗原的特異性抗體進行免疫組化染色,可以檢測和診斷許多傳染性疾病病原微生物,如乙型肝炎病毒(HBV)、巨細胞病毒(CMV)、人乳T狀瘤病毒(HPV)、皰疹病毒(HSV)、丙型肝炎病毒(HVC)、細小病毒B19、人禽流行性感冒病毒(AIV)、嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒(SARS)等等,由于免疫組化在傳染性疾病診斷中具有及時性、低風險性、高敏感性、特異性、有效性等特點,可以用于(1)用于人類新病原微生物的識別;(2)提供快速的形態(tài)學診斷,使嚴重傳染性疾病得以早期醫(yī)療;(3)在無法取得新鮮組織或尚無培養(yǎng)方法的情況下,提供診斷并對發(fā)病機制進行研究和認識。英瀚斯生物專業(yè)做實驗外包服務,一站式醫(yī)學科研平臺。免疫組化結果怎么看?浙江組織免疫組化

免疫組化流程是什么樣的?青海免疫組化可以做什么

免疫組化的特點:

1)特異性強。免疫學的基本原理決定抗原與抗體之間的結合具有高度特異性,因此,免疫組化從理論上講也是組織細胞中抗原的特定顯示,如角蛋白(keratin)顯示上皮成分,LCA顯示淋巴細胞成分。只有當組織細胞中存在交叉抗原時,才會出現(xiàn)交叉反應。

2)敏感性高。在應用免疫組化的起始階段,由于技術上的限制,只有直接法、間接法等敏感性不高的技術,那時的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍;現(xiàn)在由于ABC法或SP三步法的出現(xiàn),使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細胞中與抗原結合,這樣高敏感性的抗體抗原反應,使免疫組化方法越來越方便地應用于常規(guī)病理診斷工作。

3)定位準確、形態(tài)與功能相結合。該技術通過抗原抗體反應及呈色反應,可在組織和細胞中進行抗原的準確定位,因而可同時對不同抗原在同一組織或細胞中進行定位觀察,這樣就可以進行形態(tài)與功能相結合的研究,對病理學領域開展深入研究是十分有意義的。

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